Plásmido CRISPR de Activación (h) Nop56: sc-404035-ACT

El gen humano **NOP56** codifica **Nop56**, un componente central nucleolar esencial de las pequeñas ribonucleoproteínas nucleolares de caja C/D (snoRNP) que guían la **2′-O-metilación** y el procesamiento del **pre-rRNA** durante la biogénesis de los ribosomas. A través de sus interacciones con la **fibrilarina** y otros factores de las snoRNP, Nop56 favorece la maduración de los rRNA **18S** y **28S** y el ensamblaje adecuado de las subunidades ribosomales, lo que lo vincula con la capacidad global de traducción y la homeostasis nucleolar. La alteración de la biogénesis ribosomal y de las vías de estrés nucleolar puede modificar el control del ciclo celular y la proteostasis, haciendo que la función de NOP56 sea relevante para estudios de regulación del crecimiento y adaptación al estrés. NOP56 también se ha implicado en mecanismos neurodegenerativos asociados a expansión de repeticiones en la ataxia espinocerebelosa tipo 36 (SCA36), lo que impulsa trabajos mecanísticos sobre el metabolismo del ARN y la disfunción nucleolar.

Nop56 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NOP56 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Nop56 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NOP56 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NOP56, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Nop56. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NOP56 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Nop56 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Nop56 en células tumorales con expresión de NOP56 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.