Nop56 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404035-ACT

Il gene umano NOP56 codifica Nop56, un componente nucleolare essenziale del core delle piccole ribonucleoproteine nucleolari box C/D (snoRNP), che guidano la 2′-O-metilazione e il processamento del pre-rRNA durante la biogenesi dei ribosomi. Attraverso le sue interazioni con la fibrillarina e altri fattori delle snoRNP, Nop56 sostiene la maturazione degli rRNA 18S e 28S e il corretto assemblaggio delle subunità ribosomali, collegandosi così alla capacità traslazionale globale e all’omeostasi nucleolare. L’alterazione della biogenesi dei ribosomi e delle vie di stress nucleolare può modificare il controllo del ciclo cellulare e la proteostasi, rendendo la funzione di NOP56 rilevante per studi sulla regolazione della crescita e sull’adattamento allo stress. NOP56 è inoltre implicato in meccanismi neurodegenerativi associati all’espansione di ripetizioni nell’atassia spinocerebellare di tipo 36 (SCA36), stimolando studi meccanicistici sul metabolismo dell’RNA e sulla disfunzione nucleolare.

Nop56 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di NOP56 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Nop56 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus NOP56 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione NOP56, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Nop56. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus NOP56 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Nop56 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Nop56 nelle cellule tumorali con espressione di NOP56 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.