Nolz-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405058

Panoramica

ZNF503 (Nolz-1) codifica un fattore di trascrizione a dita di zinco che regola le decisioni sul destino cellulare modulando programmi di espressione genica specifici di linea durante lo sviluppo e la formazione dei pattern tissutali. L’attività di Nolz-1 influenza reti trascrizionali legate alla differenziazione, al controllo della proliferazione e a processi guidati dai morfogeni, inclusa la regolazione di geni responsivi all’acido retinoico. Un’espressione deregolata o un contesto regolatorio alterato di ZNF503 è stata associata a cambiamenti delle caratteristiche epitelio-mesenchimali e a una biologia tumorale dipendente dal contesto, rendendolo rilevante per lo studio del controllo trascrizionale dell’identità cellulare. In quanto proteina nucleare che si lega al DNA, Nolz-1 rappresenta un nodo maneggevole per analizzare gli input di segnalazione a monte e i circuiti regolatori genici a valle.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Nolz-1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ZNF503 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ZNF503 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ZNF503 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Nolz-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ZNF503 per lo studio della segnalazione di Nolz-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ZNF503 critici per la funzione di Nolz-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ZNF503 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Nolz-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Nolz-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ZNF503. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Nolz-1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Nolz-1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ZNF503 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ZNF503 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.