NMDAζ1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400593-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- NMDAζ1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il NMDAζ1 Double Nickase Plasmid (h) e il NMDAζ1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GRIN1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: NMDAζ1 Antibody (E-2): sc-518043
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
NMDAζ1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400593-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
NMDAζ1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400593-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GRIN1 codifica la subunità ζ1 (GluN1) del recettore NMDA umano, un componente essenziale dei recettori ionotropici del glutammato di tipo NMDA, che si assemblano come canali eterotetramerici per mediare la neurotrasmissione eccitatoria permeabile al Ca²⁺. La segnalazione del recettore NMDA regola la plasticità sinaptica, l’apprendimento e la memoria, nonché l’espressione genica dipendente dall’attività, attraverso vie che coinvolgono CaMKII/CREB e programmi trascrizionali a valle. La funzione recettoriale dipendente da GRIN1 si intreccia anche con processi di sviluppo neuronale come la sinaptogenesi e il rimodellamento dendritico, e contribuisce alle risposte di stress eccitotossico in condizioni di eccessiva stimolazione glutammatergica. La variabilità genetica o una segnalazione del recettore NMDA deregolata sono state associate a fenotipi neuroevolutivi e neuropsichiatrici, a supporto di studi meccanicistici della funzione recettoriale in modelli cellulari rilevanti per la malattia.
NMDAζ1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GRIN1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GRIN1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GRIN1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GRIN1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.