Plasmide CRISPR d'Activation (h) nm23-H1: sc-401221-ACT

NME1 code nm23-H1, une kinase des nucléosides diphosphates qui maintient l’équilibre cellulaire NTP/NDP et contribue à des processus de signalisation liés à la prolifération, à la motilité et aux réponses au stress. nm23-H1 a été impliquée dans la régulation de la dynamique du cytosquelette, du trafic membranaire et de programmes transcriptionnels qui façonnent la migration et la différenciation cellulaires. Une expression altérée de NME1 est fréquemment étudiée dans le contexte de la biologie tumorale, où elle a été associée à l’invasion et au comportement métastatique d’une manière dépendante du type cellulaire et du contexte. En tant que gène humain largement exprimé, NME1 constitue un nœud utile pour étudier le couplage métabolisme–signalisation et la plasticité phénotypique dans des modèles cellulaires ingénierés.

nm23-H1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NME1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

nm23-H1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NME1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NME1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de nm23-H1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NME1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de nm23-H1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie nm23-H1 dans les cellules tumorales présentant une expression de NME1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.