Nischarin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404823-ACT

O NISCH humano codifica a Nischarin, uma proteína citosólica de ancoragem (scaffolding) originalmente identificada como um fator de interação com o receptor de imidazolina, que modula a sinalização da integrina α5 e a organização do citoesqueleto. A Nischarin coordena a adesão celular, a migração e o tráfego endocítico por meio de interações com vias de adesão focal e com as GTPases da família Rho, influenciando a remodelação de actina e a motilidade direcional. Ela tem sido associada à regulação de nós de sinalização intracelular, como cascatas de MAPK, e de programas de transporte vesicular que moldam a polaridade celular e o comportamento invasivo. Alterações na expressão de NISCH foram relatadas em múltiplos contextos de doença, incluindo biologia do câncer e fenótipos neurocomportamentais, o que a torna relevante para estudos mecanísticos de migração, vias associadas à metástase e sinalização neuronal.

Nischarin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NISCH sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Nischarin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NISCH em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NISCH, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Nischarin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NISCH nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Nischarin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Nischarin em células tumorais com expressão de NISCH silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.