Plásmido CRISPR de Activación (h) Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 5/CHRNA5: sc-401702-ACT

CHRNA5 codifica la subunidad alfa 5 del receptor nicotínico de acetilcolina, un componente accesorio de canales catiónicos heteroméricos activados por ligando que modula el ensamblaje del receptor, la conductancia iónica y la cinética de desensibilización en respuesta a la acetilcolina y la nicotina. Al moldear la señalización colinérgica, CHRNA5 influye en la despolarización de la membrana, la señalización dependiente de calcio y las vías posteriores de excitabilidad neuronal y plasticidad sináptica. La variación genética y la expresión alterada de CHRNA5 se han vinculado con la susceptibilidad a la dependencia de la nicotina y rasgos relacionados con el tabaquismo, y se han investigado en el contexto de la biología del epitelio pulmonar y de fenotipos neuropsiquiátricos. Como subunidad reguladora, CHRNA5 puede ajustar las respuestas del receptor de manera específica según el tipo celular, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos de circuitos colinérgicos y programas transcripcionales dependientes de estímulos.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 5/CHRNA5 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CHRNA5 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 5/CHRNA5 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CHRNA5 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CHRNA5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 5/CHRNA5. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CHRNA5 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 5/CHRNA5 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 5/CHRNA5 en células tumorales con expresión de CHRNA5 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.