Plásmido CRISPR de Activación (h) Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 3/CHRNA3: sc-401582-ACT

CHRNA3 codifica la subunidad α3 de los receptores nicotínicos neuronales de acetilcolina, canales catiónicos activados por ligando que median la transmisión sináptica rápida y regulan la excitabilidad de la membrana mediante la entrada de Na⁺ y Ca²⁺. Los nAChR que contienen α3 son prominentes en los ganglios autónomos y en circuitos neuronales selectos, donde influyen en la liberación de neurotransmisores, la señalización dependiente de calcio y la expresión génica dependiente de la actividad. A través de la señalización colinérgica, CHRNA3 contribuye a vías que controlan la diferenciación neuronal, la plasticidad sináptica y el acoplamiento estímulo-secreción. Estudios genéticos y de expresión han vinculado la variación en el locus CHRNA3 y la actividad alterada del receptor con la dependencia a la nicotina y otros fenotipos neuropsiquiátricos, lo que respalda su relevancia en la biología de la adicción y en la investigación de la función de los neurocircuitos.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 3/CHRNA3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CHRNA3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 3/CHRNA3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CHRNA3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CHRNA3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 3/CHRNA3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CHRNA3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 3/CHRNA3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 3/CHRNA3 en células tumorales con expresión de CHRNA3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.