Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 1/CHRNA1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401880-ACT

CHRNA1 codifica a subunidade α1 do recetor nicotínico de acetilcolina do tipo muscular, um canal catiónico controlado por ligando que inicia uma despolarização rápida na junção neuromuscular em resposta à acetilcolina. Como parte do complexo recetor pentamérico, a CHRNA1 contribui para o “gating” (abertura/fecho) do canal, a seletividade iónica e a transmissão sináptica que liga a atividade do neurónio motor à contração do músculo esquelético. Este recetor atua nas vias de sinalização colinérgica e de acoplamento excitação–contração, influenciando a excitabilidade da membrana e processos a jusante dependentes de cálcio. A desregulação ou variações patogénicas em CHRNA1 estão associadas a síndromes miasténicas congénitas e a defeitos relacionados da transmissão neuromuscular, tornando-o relevante para estudos sobre a biogénese do recetor, a manutenção sináptica e canalopatias.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 1/CHRNA1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CHRNA1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 1/CHRNA1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CHRNA1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CHRNA1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 1/CHRNA1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CHRNA1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 1/CHRNA1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 1/CHRNA1 em células tumorais com expressão de CHRNA1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.