NHE-6 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404829

Panoramica

SLC9A6 codifica lo scambiatore endosomiale Na+/H+ NHE-6, un regolatore chiave del pH degli organelli e dell’omeostasi ionica, che supporta la maturazione degli endosomi, il riciclo dei recettori e il traffico vescicolare. Modulando i gradienti protonici nel lume, NHE-6 influenza processi quali la segnalazione dei fattori di crescita, lo smistamento delle proteine di membrana e le vie di degradazione collegate ai lisosomi. Nei neuroni, l’attività di SLC9A6 è strettamente legata allo sviluppo sinaptico e al trasporto intracellulare, e la sua disfunzione è stata associata a fenotipi neuroevolutivi e a disabilità intellettiva sindromica legata al cromosoma X. Queste caratteristiche rendono NHE-6 un nodo utile per studiare la biologia endosomiale, la dinamica della segnalazione e i meccanismi genotipo–fenotipo in modelli cellulari umani.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NHE-6 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SLC9A6 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SLC9A6 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SLC9A6 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NHE-6.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SLC9A6 per lo studio della segnalazione di NHE-6, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SLC9A6 critici per la funzione di NHE-6
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SLC9A6 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal NHE-6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal NHE-6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SLC9A6. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal NHE-6 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR NHE-6 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SLC9A6 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SLC9A6 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.