Neurogenin 2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-419233-ACT

Neurog2 codifica a Neurogenina 2, um fator de transcrição do tipo hélice‑alça‑hélice básica (bHLH) que atua como um determinante proneural durante o desenvolvimento do sistema nervoso em camundongos. Ele promove o compromisso com a linhagem neuronal e programas de diferenciação ao regular redes transcricionais neurogênicas e ao interagir com a inibição lateral mediada por Notch para equilibrar a manutenção de progenitores versus a produção de neurônios. A Neurogenina 2 também influencia o crescimento de neuritos, a migração e a especificação de subtipos por meio do controle coordenado de genes a jusante envolvidos na remodelação do citoesqueleto e na maturação sináptica. Alterações na expressão ou na atividade de NEUROG2 são frequentemente estudadas no contexto de disrupções regulatórias durante o neurodesenvolvimento e de erros de especificação do destino de linhagem em modelos de progenitores neurais.

Neurogenin 2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Neurog2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Neurogenin 2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Neurog2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Neurog2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Neurogenin 2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Neurog2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Neurogenin 2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Neurogenin 2 em células tumorais com expressão de Neurog2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.