Partículas Lentivirales de Activación (h) NDUFS1: sc-416401-LAC

NDUFS1 codifica una subunidad central esencial del complejo I mitocondrial (NADH:ubiquinona oxidorreductasa), que sustenta la fosforilación oxidativa al transferir electrones desde el NADH a la ubiquinona y contribuir al bombeo de protones a través de la membrana mitocondrial interna. A través de su función en la cadena de transporte de electrones, NDUFS1 influye en la producción celular de ATP, el mantenimiento del potencial de membrana mitocondrial y la homeostasis redox, con efectos posteriores sobre la señalización de especies reactivas de oxígeno y la adaptación metabólica. La alteración de la función del complejo I se asocia con fenotipos de disfunción mitocondrial que afectan a tejidos con alta demanda energética y puede modificar la susceptibilidad al estrés oxidativo. Como gen mitocondrial codificado en el núcleo, NDUFS1 se estudia ampliamente en bioenergética, control de calidad mitocondrial y modelos relevantes de enfermedad con alteración de la cadena respiratoria.

Las partículas de activación lentiviral NDUFS1 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de NDUFS1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral NDUFS1 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción NDUFS1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de NDUFS1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo NDUFS1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.