Plásmido CRISPR de Activación (h) NCAM2: sc-404803-ACT

NCAM2 (molécula de adhesión celular neural 2) codifica una proteína de adhesión asociada a la membrana de la superfamilia de las inmunoglobulinas, enriquecida en el sistema nervioso, que favorece el crecimiento de neuritas, la guía axonal y el ensamblaje de sinapsis. Mediante interacciones homofílicas y heterofílicas en la superficie celular, NCAM2 contribuye al reconocimiento célula–célula y a la estabilización de los contactos neuronales, influyendo en la remodelación del citoesqueleto y en la conectividad dependiente de la actividad. Alteraciones en la expresión o la regulación de NCAM2 se han implicado en fenotipos del neurodesarrollo y neuropsiquiátricos, en consonancia con su papel en el modelado de redes sinápticas y la formación de circuitos neuronales. Como marcador y modulador de la diferenciación neuronal y la plasticidad, NCAM2 es ampliamente relevante para estudios de señalización dependiente de la adhesión y de la organización sináptica.

NCAM2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NCAM2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

NCAM2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NCAM2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NCAM2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de NCAM2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NCAM2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de NCAM2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía NCAM2 en células tumorales con expresión de NCAM2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.