Na+ CP type IIIα Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422820
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- Na+ CP type IIIα El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico Na+ CP type IIIα, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Na+ CP type IIIα Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-422820 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Scn3a codifica el canal de sodio dependiente de voltaje del ratón Na+ CP tipo IIIα, una subunidad α formadora de poro que impulsa rápidas corrientes entrantes de Na+ que subyacen al inicio y la propagación del potencial de acción en células excitables. Al modular el umbral de disparo, la frecuencia de descarga y la recuperación de la inactivación, Na+ CP tipo IIIα influye en la excitabilidad de las redes neuronales y en programas de señalización dependientes de la actividad vinculados a la transmisión sináptica. La actividad de SCN3A se intersecta con vías de excitabilidad de membrana que acoplan el flujo iónico a la transcripción dependiente de calcio, la conducción axonal y los patrones del neurodesarrollo. Las alteraciones genéticas y funcionales de SCN3A se han asociado con fenotipos de excitabilidad modificados y se estudian en el contexto de mecanismos relacionados con la epilepsia, trastornos del neurodesarrollo y disfunción de circuitos.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO Na+ CP type IIIα (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Scn3a en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Scn3a junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Scn3a tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Na+ CP type IIIα.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Scn3a para la investigación de la señalización de Na+ CP type IIIα, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Scn3a críticos para la función de Na+ CP type IIIα
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Scn3a para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido Na+ CP type IIIα CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Na+ CP type IIIα CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Scn3a. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Na+ CP type IIIα (m) y el plásmido HDR Na+ CP type IIIα (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Scn3a para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Scn3a definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.