Nanos2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404123

Descripción general

NANOS2 codifica Nanos2, una proteína de unión a ARN evolutivamente conservada que actúa como regulador posranscripcional del destino de las células germinales. En la biología humana, NANOS2 se asocia con el mantenimiento de la identidad de la línea germinal masculina al promover programas de diferenciación de espermatogonias, a la vez que reprime la entrada aberrante en meiosis mediante el control de la estabilidad y la traducción del ARNm. Su función se entrecruza con redes reguladoras de la línea germinal y con procesos asociados a gránulos de ARN que configuran la remodelación del transcriptoma durante la gametogénesis. La desregulación de vías de desarrollo de células germinales en las que participan proteínas de la familia NANOS es relevante para estudios sobre infertilidad, trastornos del desarrollo gonadal y biología de tumores de células germinales.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Nanos2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen NANOS2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del NANOS2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de NANOS2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Nanos2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en NANOS2 para la investigación de la señalización de Nanos2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de NANOS2 críticos para la función de Nanos2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de NANOS2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Nanos2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Nanos2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus NANOS2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Nanos2 (h) y el plásmido HDR Nanos2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología NANOS2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana NANOS2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.