Plasmide CRISPR d'Activation (h) Nanog: sc-418033-ACT

Le gène humain **NANOG** code le facteur de transcription à homéoboîte **Nanog**, un régulateur central de la pluripotence qui maintient l’auto-renouvellement des cellules souches embryonnaires et réprime l’engagement vers des lignages différenciés. Nanog agit au sein du réseau central de la pluripotence avec **OCT4** et **SOX2**, en coordonnant des programmes transcriptionnels et des états de la chromatine qui influencent la différenciation, le remodelage épigénétique et les décisions de destin cellulaire. Une expression dérégulée de **NANOG** est associée à des phénotypes de type « cellules souches », à une altération des signalisations développementales et à une reprogrammation transcriptionnelle observées dans divers modèles de maladie, notamment en oncologie, où la plasticité des cellules tumorales et des états associés à la résistance sont étudiés. En tant que facteur nucléaire se liant à l’ADN, Nanog constitue un nœud accessible pour explorer les circuits transcriptionnels qui sous-tendent le développement et l’identité cellulaire.

Nanog Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NANOG sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Nanog Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NANOG dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NANOG, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Nanog. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NANOG natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Nanog au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Nanog dans les cellules tumorales présentant une expression de NANOG silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.