Plásmido Doble Nickase (h) N-type Ca CP α1B: sc-402397-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)N-type Ca CP α1B consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa N-type Ca CP α1B (h) y el plásmido de doble nickasa N-type Ca CP α1B (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CACNA1B. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) N-type Ca CP α1B | sc-402397-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) N-type Ca CP α1B | sc-402397-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CACNA1B codifica la subunidad α1B, formadora del poro, de los canales de calcio tipo N dependientes de voltaje (CaV2.2), que median la entrada de Ca2+ inducida por despolarización en células excitables. Este canal acopla la actividad eléctrica de la membrana con la fusión de vesículas presinápticas y la liberación de neurotransmisores, integrándose en redes de señalización dependientes de Ca2+ que regulan la plasticidad sináptica, la excitabilidad neuronal y la expresión génica dependiente de la actividad. La función de CACNA1B está estrechamente ligada a la modulación por receptores acoplados a proteína G y a vías posteriores que controlan la dinámica de la transmisión sináptica. La variación genética o una actividad desregulada de CaV2.2 se ha asociado con un procesamiento nociceptivo alterado y con fenotipos neuropsiquiátricos, lo que respalda su relevancia para estudios mecanísticos de la función de los circuitos neuronales.
N-type Ca CP α1B El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CACNA1B en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CACNA1B. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CACNA1B. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CACNA1B alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.