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Myosin IdCRISPR激活质粒(h) | sc-403425-ACT | 20 µg | $397.00 |
人类 MYO1D 基因编码肌球蛋白 Id(myosin Id),这是一种以肌动蛋白为轨道、与膜相关的马达蛋白,参与将皮质肌动蛋白细胞骨架与细胞内膜系统相连接。肌球蛋白 Id 支持膜运输、内吞回收以及细胞极性与形态的组织等过程,将细胞骨架重塑与质膜处信号的空间调控联系起来。通过这些功能,MYO1D 能影响依赖定向囊泡运输以及细胞骨架依赖性受体分布的信号通路。肌动蛋白–膜动力学与极性程序的失调与疾病相关表型(包括细胞迁移改变和上皮组织结构异常)有关,因此 MYO1D 是研究细胞稳态机制的有用靶点。
Myosin Id CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性MYO1D的表达。
Myosin Id CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的MYO1D基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于MYO1D转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性Myosin Id表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的MYO1D位点,并能够研究内源性位点上依赖于Myosin Id的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在MYO1D表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Myosin Id通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。