Partículas Lentivirales de Activación (m) Myocardin: sc-431931-LAC

Myocd codifica la miocardina, un potente coactivador transcripcional que se asocia con el factor de respuesta al suero (SRF) para controlar programas génicos del músculo liso y del músculo cardíaco, incluidos componentes contráctiles y del citoesqueleto. Al integrar señales derivadas de la dinámica de la actina y de las vías relacionadas con RhoA/MRTF, la miocardina ayuda a coordinar la diferenciación miogénica, la maduración del músculo liso vascular y el mantenimiento del fenotipo contráctil. La actividad desregulada de MYOCD se vincula con un remodelado vascular anómalo y una plasticidad alterada del músculo liso, lo que la hace relevante para estudios del desarrollo cardiovascular y de cambios en la expresión génica asociados a enfermedades. Por ello, la miocardina de ratón se utiliza ampliamente como modelo para el control transcripcional de la identidad de linaje muscular y de redes de remodelado sensibles al estrés.

Las partículas de activación lentiviral Myocardin (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Myocd en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Myocardin (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Myocd, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Myocardin. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Myocd y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.