MYL3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403198-ACT

MYL3 codifica a cadeia leve de miosina 3, um componente regulatório do complexo motor miosina II que modula o ciclo de pontes cruzadas actina–miosina e a geração de força contrátil no músculo estriado. Ao ajustar a atividade ATPase da miosina e as interações entre filamentos, MYL3 contribui para a organização do sarcômero, a contratilidade sensível ao cálcio e a mecânica miofibrilar. Alterações na expressão de MYL3 ou variantes foram associadas a fenótipos cardiomiopáticos e à disfunção do músculo cardíaco, tornando-o um marcador útil para estudar a biologia do sarcômero e a sinalização associada à contratilidade. Assim, o MYL3 humano é relevante para investigar o desenvolvimento muscular, respostas ao estresse mecânico e vias que regulam a estrutura e o desempenho dos cardiomiócitos.

MYL3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MYL3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MYL3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MYL3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MYL3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MYL3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MYL3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MYL3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MYL3 em células tumorais com expressão de MYL3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.