MYH1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400420-ACT

MYH1 はミオシン重鎖1（myosin heavy chain 1）をコードしており、筋節（サルコメア）内で ATP 依存的なクロスブリッジサイクルを回すことで、アクチンに基づく収縮を駆動する速筋型骨格筋のモータータンパク質である。太いフィラメントの中核構成要素として、MYH1 は筋線維タイプの規定、力発生、収縮速度（収縮動態）に寄与し、筋原線維形成、カルシウム制御、活動に対する代謝適応を調節する経路と統合されて働く。ミオシン重鎖の発現パターンの違いは、骨格筋の分化、リモデリング、除神経や運動模倣シグナルに対する応答を研究するためによく用いられる。MYH1 に関連する収縮装置のアーキテクチャ変化を含むサルコメア遺伝子プログラムの破綻は、ミオパチーや、より広範な神経筋機能障害の機序研究において重要である。

MYH1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MYH1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MYH1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MYH1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMYH1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MYH1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMYH1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMYH1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMYH1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMYH1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。