MyD88 Double Nickaseプラスミド (m): sc-421774-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- MyD88 Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- MyD88ダブルニカースプラスミド（m）およびMyD88ダブルニカースプラスミド（m2）は、Myd88を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: MyD88 抗体 (E-11): sc-74532
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
MyD88 Double Nickaseプラスミド (m) | sc-421774-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MyD88 Double Nickaseプラスミド (m2) | sc-421774-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
マウスMyd88は、骨髄系分化一次応答タンパク質88（MyD88）をコードしており、MyD88は大部分のToll様受容体（TLR）およびインターロイキン1受容体（IL-1R）ファミリーに必須のアダプター分子である。MyD88は受容体の活性化をIRAK–TRAF6シグナル伝達、NF-κBの活性化、ならびにMAPKによって駆動される炎症性遺伝子発現へと連結する。MyD88依存性シグナルは、自然免疫細胞の活性化、サイトカイン産生、抗菌応答を統合的に制御するとともに、その後の獲得免疫の形成にも影響を与える。MyD88経路の制御破綻は、感染生物学や炎症性疾患の機序における異常な炎症シグナルをモデル化するために広く用いられており、自然免疫シグナルが組織恒常性や腫瘍—免疫相互作用にどのように影響するかを研究する際にも利用されている。
MyD88 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Myd88 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Myd88内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Myd88の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Myd88が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。