mucolipin 1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-430117
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- mucolipin 1 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico mucolipin 1, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
mucolipin 1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-430117 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Mcoln1 codifica mucolipina 1 (TRPML1), un canal catiónico permeable a Ca2+ del sistema endolisosomal que regula la biogénesis lisosomal, el tráfico de membranas y el flujo autofágico. La liberación de Ca2+ mediada por TRPML1 favorece la fusión lisosoma–autofagosoma, el procesamiento de la carga endocítica y vías de señalización vinculadas a la detección de nutrientes y a las respuestas celulares al estrés. La alteración de la función de mucolipina 1 perturba la homeostasis lisosomal, promoviendo la acumulación de sustratos no degradados y un control de calidad mitocondrial alterado. Por ello, Mcoln1 se estudia ampliamente en modelos de trastornos por almacenamiento lisosomal y de defectos de la función endolisosomal asociados a la neurodegeneración.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO mucolipin 1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Mcoln1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Mcoln1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Mcoln1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína mucolipin 1.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Mcoln1 para la investigación de la señalización de mucolipin 1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Mcoln1 críticos para la función de mucolipin 1
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Mcoln1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido mucolipin 1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido mucolipin 1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Mcoln1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR mucolipin 1 (m) y el plásmido HDR mucolipin 1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Mcoln1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Mcoln1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.