MTHFD1L Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-417762

Panoramica

MTHFD1L codifica un enzima mitocondriale dipendente dai folati che supporta il metabolismo a un carbonio generando formiato e altre unità a un carbonio correlate, utilizzate per sostenere i cicli dei folati nel citosol. Questa attività collega il catabolismo mitocondriale di serina/glicina alla biosintesi dei nucleotidi, alla capacità di metilazione e all’equilibrio redox, influenzando la replicazione del DNA e la regolazione epigenetica. Alterazioni della funzione di MTHFD1L sono state associate a rimodellamento metabolico e a fenotipi proliferativi osservati in diversi contesti patologici, incluso il riassetto delle vie a un carbonio correlato al cancro. Di conseguenza, MTHFD1L è spesso studiato nell’ambito del metabolismo dei folati, della funzione mitocondriale e della stabilità del genoma in condizioni di stress nutrizionale o ossidativo.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MTHFD1L (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MTHFD1L in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MTHFD1L insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MTHFD1L a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MTHFD1L.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MTHFD1L per lo studio della segnalazione di MTHFD1L, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MTHFD1L critici per la funzione di MTHFD1L
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MTHFD1L per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MTHFD1L CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal MTHFD1L CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MTHFD1L. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MTHFD1L Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR MTHFD1L (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MTHFD1L per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MTHFD1L definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.