MTHFD1L Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-417762

Visão geral

MTHFD1L codifica uma enzima mitocondrial dependente de folato que sustenta o metabolismo de um carbono ao gerar formiato e outras unidades de um carbono relacionadas, usadas para manter os ciclos citosólicos do folato. Essa atividade conecta o catabolismo mitocondrial de serina/glicina à biossíntese de nucleotídeos, à capacidade de metilação e ao equilíbrio redox, influenciando a replicação do DNA e a regulação epigenética. Alterações na função de MTHFD1L têm sido associadas a remodelação metabólica e a fenótipos proliferativos observados em diversos contextos de doença, incluindo a reprogramação da via de um carbono relacionada ao câncer. Como resultado, MTHFD1L é frequentemente estudado no contexto do metabolismo do folato, da função mitocondrial e da estabilidade genômica sob estresse nutricional ou oxidativo.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO MTHFD1L (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene MTHFD1L em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do MTHFD1L, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do MTHFD1L na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína MTHFD1L.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de MTHFD1L para a investigação da sinalização de MTHFD1L, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) MTHFD1L críticos para a função MTHFD1L
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos MTHFD1L para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo MTHFD1L Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo MTHFD1L Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus MTHFD1L. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo MTHFD1L Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR MTHFD1L (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia MTHFD1L para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo MTHFD1L definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.