MRP2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419711

Descripción general

Abcc2 codifica el transportador de la familia ATP-binding cassette MRP2 (ABCC2), una bomba de eflujo de membrana plasmática que exporta conjugados de glutatión, glucurónido y sulfato de metabolitos endógenos y xenobióticos. En el ratón, MRP2 favorece la desintoxicación celular y la homeostasis redox al acoplar la hidrólisis de ATP al transporte de aniones orgánicos, incluidos conjugados de bilirrubina y otros metabolitos de fase II. Su actividad se integra con las vías de depuración hepática y renal y contribuye a las funciones de barrera en epitelios polarizados mediante un tráfico coordinado y su localización canalicular/apical. Las alteraciones de la función de ABCC2/MRP2 se estudian con frecuencia en el contexto de fenotipos colestásicos, la biología relacionada con la hiperbilirrubinemia y los mecanismos de resistencia a múltiples fármacos en sistemas modelo.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO MRP2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Abcc2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Abcc2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Abcc2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína MRP2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Abcc2 para la investigación de la señalización de MRP2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Abcc2 críticos para la función de MRP2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Abcc2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido MRP2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido MRP2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Abcc2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR MRP2 (m) y el plásmido HDR MRP2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Abcc2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Abcc2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.