Plásmido CRISPR de Activación (h) MRP-S18A: sc-412466-ACT

MRPS18A codifica la proteína ribosomal mitocondrial S18A (MRP‑S18A), un componente codificado en el núcleo de la subunidad pequeña 28S del mitorribosoma de mamíferos. MRP‑S18A favorece la traducción mitocondrial de subunidades de fosforilación oxidativa (OXPHOS) codificadas por el ADNmt, influyendo así en la función de la cadena respiratoria, la producción de ATP y la proteostasis mitocondrial. La alteración de proteínas del mitorribosoma puede perjudicar la expresión génica mitocondrial, activar respuestas integradas al estrés y modificar la señalización metabólica que se cruza con la apoptosis y la homeostasis de especies reactivas de oxígeno. Por ello, MRPS18A es relevante para estudios sobre disfunción mitocondrial y remodelación bioenergética observadas en diversos trastornos humanos, incluidas la neurodegeneración y la adaptación metabólica asociada al cáncer.

MRP-S18A El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MRPS18A sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MRP-S18A El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MRPS18A en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MRPS18A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MRP-S18A. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MRPS18A y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MRP-S18A en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MRP-S18A en células tumorales con expresión de MRPS18A silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.