MMP2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400126-ACT

Das humane Gen **MMP2** kodiert die Matrix-Metalloproteinase‑2 (Gelatinase A), eine sekretierte, zinkabhängige Endopeptidase, die Kollagen Typ IV und weitere Komponenten der extrazellulären Matrix abbaut und dadurch den Umbau der Basalmembran ermöglicht. Die Aktivität von MMP2 wird durch proteolytische Aktivierung sowie durch Hemmung durch TIMPs reguliert und ist eng mit perizellulären Proteasenetzwerken verbunden, an denen MT1‑MMP (MMP14) und integrinvermittelte Adhäsionssignale beteiligt sind. Über den Umsatz der extrazellulären Matrix beeinflusst MMP2 die Zellmigration, angiogenes Remodeling, Wundheilung und Gewebemorphogenese. Eine fehlregulierte Expression oder Aktivierung von MMP2 wird häufig im Kontext von Tumorinvasion und Metastasierung, fibrotischem Remodeling, vaskulärer Pathologie und entzündlich bedingten Gewebeschäden untersucht.

MMP2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MMP2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MMP2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MMP2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MMP2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MMP2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MMP2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MMP2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MMP2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MMP2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.