Mlx Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403499-ACT

MLX codifica Mlx, um fator de transcrição do tipo hélice–alça–hélice básica com zíper de leucina, que forma heterodímeros obrigatórios com parceiros da família Mondo, como MLXIP (MondoA) e MLXIPL (ChREBP), para acoplar a disponibilidade de nutrientes à expressão gênica. Esses complexos regulam programas de metabolismo de carboidratos e lipídios, incluindo a transcrição responsiva à glicose e redes gênicas glicolíticas/lipogênicas, conectando o sensoriamento de metabólitos mitocondriais e citosólicos ao controle transcricional. Por meio de interações com circuitos transcricionais mais amplos MYC/MAX/MLX, Mlx contribui para a coordenação do crescimento, da homeostase energética e de respostas adaptativas ao estresse. A desregulação de programas transcricionais associados a MLX tem sido implicada em vias relevantes para doenças metabólicas e no redirecionamento metabólico de células tumorais, sustentando seu uso em estudos mecanísticos do controle transcricional no metabolismo e em estados proliferativos.

Mlx O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MLX sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Mlx O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MLX em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MLX, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Mlx. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MLX nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Mlx no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Mlx em células tumorais com expressão de MLX silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.