MLK2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-406968-ACT

O gene humano MAP3K10 codifica a mixed lineage kinase 2 (MLK2), uma MAP quinase quinase quinase que integra sinais a montante provenientes de pequenas GTPases e de estímulos de stress para propagar cascatas de fosforilação. A MLK2 é um regulador-chave da sinalização por MAPK, em particular das vias JNK e p38, moldando programas transcricionais que controlam a apoptose, as respostas inflamatórias e a diferenciação neuronal. Através destes nós de sinalização, a MLK2 influencia a dinâmica do citoesqueleto e a adaptação celular ao stress, processos frequentemente estudados em biologia do cancro e em investigação de neurodegeneração. A atividade desregulada de MAP3K10 tem sido associada a sinalização anómala ativada por stress e a vias de sobrevivência alteradas, tornando-o relevante para estudos mecanísticos de reconfiguração de vias.

MLK2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MAP3K10 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MLK2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MAP3K10 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MAP3K10, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MLK2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MAP3K10 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MLK2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MLK2 em células tumorais com expressão de MAP3K10 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.