Mitofilin Double Nickaseプラスミド (m): sc-429376-NIC

Immtは、ミトコンドリア内膜の構造維持に関わる内膜オーガナイジングシステム（MICOS）の中核構成要素であるMitofilinをコードしており、クリステ接合部（cristae junction）のアーキテクチャを保ち、内膜の適切な曲率形成を支えます。Mitofilinは呼吸鎖複合体の組み立てを協調し、酸化的リン酸化の効率に影響を与えるほか、ミトコンドリアのダイナミクス、プロテオスタシス、アポトーシスシグナルにも寄与します。マウス細胞では、Immtの機能破綻はしばしばミトコンドリア超微細構造の変化、エネルギー産生能（バイオエネルゲティクス）の低下、さらに統合ストレス応答シグナルやマイトファジーといったストレス応答経路への二次的影響と関連づけられます。これらの機能によりImmtは、ミトコンドリア病の機序、神経変性モデル、心代謝機能障害、そしてクリステ再構築が細胞恒常性に影響する状況を研究する際に、頻繁に標的とされる遺伝子です。

Mitofilin ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Immt 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Immt内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Immtの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Immtが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。