Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
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MITF Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m2): sc-421654-KO-2
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- MITF El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m2) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico MITF, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: MITF Anticuerpo (D-9): sc-515925
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
MITF Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m2) | sc-421654-KO-2 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Mitf codifica el factor de transcripción asociado a microftalmia (MITF), un regulador básico de hélice-bucle-hélice con cremallera de leucina que coordina la especificación de linaje y los programas de diferenciación en melanocitos y otros tipos celulares relacionados derivados de la cresta neural. MITF controla redes transcripcionales que gobiernan la pigmentación, la biogénesis de los melanosomas, la progresión del ciclo celular y la supervivencia, integrando señales de vías como MAPK/ERK y cAMP/CREB. En modelos de ratón, la alteración de la actividad de Mitf afecta el desarrollo de los melanocitos, los fenotipos pigmentarios y funciones relacionadas con la inmunidad en mastocitos, lo que vincula a este gen con estudios mecanísticos de la melanogénesis y la plasticidad de linaje. La desregulación de los programas dependientes de MITF se utiliza ampliamente para investigar vías relevantes para la biología del melanoma, incluidos el cambio de estado de diferenciación y las respuestas al estrés.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO MITF (m2) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Mitf en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Mitf junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Mitf tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína MITF.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Mitf para la investigación de la señalización de MITF, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Mitf críticos para la función de MITF
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Mitf para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido MITF CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido MITF CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Mitf. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR MITF (m) y el plásmido HDR MITF (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Mitf para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Mitf definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.