Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
MIS Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400715
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- MIS El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico MIS, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: MIS Anticuerpo (B-11): sc-166752
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
MIS Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-400715 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
La hormona antimülleriana (AMH), también conocida como sustancia inhibidora mülleriana (MIS), es una glicoproteína de la superfamilia TGF-β que señaliza principalmente a través de AMHR2 y, aguas abajo, de SMAD1/5/8 para regular el desarrollo del tracto reproductor y la función gonadal. En el ovario, la AMH producida por las células de la granulosa modula el reclutamiento folicular y la respuesta a la FSH, configurando el equilibrio entre el crecimiento folicular y la quiescencia. En el testículo, la MIS procedente de las células de Sertoli impulsa la regresión de los conductos de Müller durante la diferenciación sexual masculina. La señalización de AMH/MIS desregulada y la expresión alterada se estudian en trastornos del desarrollo sexual, fisiología ovárica y biología tumoral relacionada con el sistema endocrino.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO MIS (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen AMH en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del AMH junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de AMH tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína MIS.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en AMH para la investigación de la señalización de MIS, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de AMH críticos para la función de MIS
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de AMH para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido MIS CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido MIS CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus AMH. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR MIS (h) y el plásmido HDR MIS (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología AMH para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana AMH definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.