Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
MiRP1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-418462
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- MiRP1 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico MiRP1, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: MiRP1 Anticuerpo (H-4): sc-374667
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
MiRP1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-418462 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
KCNE2 codifica el péptido humano relacionado con MinK 1 (MiRP1), una subunidad β transmembrana de paso único que modula la función de los canales de potasio dependientes de voltaje, incluido KCNH2/hERG, para ajustar la compuerta (gating), el tráfico intracelular y la repolarización de la membrana. A través de sus efectos sobre la duración del potencial de acción cardíaco y el transporte iónico epitelial, MiRP1 contribuye a la excitabilidad eléctrica y a la homeostasis electrolítica en tejidos como el corazón y el epitelio gastrointestinal. La alteración de la regulación de canales dependiente de KCNE2 se asocia con cambios en la reserva de repolarización y en la susceptibilidad a arritmias, y también se ha estudiado en relación con la fisiología tiroidea y gástrica. Como subunidad moduladora, MiRP1 ofrece un punto de entrada mecanístico para analizar complejos macromoleculares de canales iónicos, el control de calidad de proteínas de membrana y los cambios en la excitabilidad dependientes de estímulos.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO MiRP1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen KCNE2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del KCNE2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de KCNE2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína MiRP1.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en KCNE2 para la investigación de la señalización de MiRP1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de KCNE2 críticos para la función de MiRP1
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de KCNE2 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido MiRP1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido MiRP1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus KCNE2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR MiRP1 (h) y el plásmido HDR MiRP1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología KCNE2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana KCNE2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.