Plasmide CRISPR d'Activation (h) MIF: sc-400574-ACT

Le facteur inhibiteur de la migration des macrophages (MIF) est une cytokine humaine pléiotrope dotée d’une activité tautomérase, qui régule les réponses immunitaires innées et adaptatives, la survie cellulaire et la signalisation du stress. Il agit via des récepteurs, notamment CD74, avec des co‑récepteurs tels que CXCR2/CXCR4, en activant en aval les voies MAPK/ERK, PI3K/AKT et NF‑κB afin de moduler l’expression de gènes inflammatoires et le recrutement des leucocytes. Le MIF interagit également avec la signalisation des glucocorticoïdes et l’homéostasie rédox, influençant la polarisation des macrophages, les programmes angiogéniques et la dynamique du microenvironnement tumoral et immunitaire. Une expression dérégulée du MIF a été associée à des maladies inflammatoires chroniques, à la fibrose et à des processus liés au cancer, ce qui en fait un nœud pertinent pour des études mécanistiques de la régulation immunitaire et des réseaux de signalisation impliqués dans les maladies.

MIF Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MIF sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MIF Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MIF dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MIF, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MIF. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MIF natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MIF au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MIF dans les cellules tumorales présentant une expression de MIF silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.