Plásmido CRISPR de Activación (h) MFSD2: sc-405672-ACT

MFSD2A codifica MFSD2, un transportador dependiente de sodio de lisofosfatidilcolinas que media la captación de ácido docosahexaenoico (DHA) a través de barreras endoteliales, con funciones destacadas en la barrera hematoencefálica. Al regular el influjo de lípidos y la composición de fosfolípidos de membrana, MFSD2A favorece el neurodesarrollo, el mantenimiento neuronal y la integridad de la barrera, a la vez que se integra en vías más amplias de transporte de lípidos y de homeostasis metabólica. MFSD2A también contribuye a la supresión de la transcitosis vesicular en el endotelio cerebral, vinculando su actividad al control del tráfico endotelial y a una función barrera estricta. La expresión o función alteradas de MFSD2A se han asociado con fenotipos del neurodesarrollo y con una permeabilidad de barrera desregulada, por lo que resulta relevante para estudios del metabolismo lipídico del SNC y de la biología endotelial.

MFSD2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MFSD2A sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MFSD2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MFSD2A en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MFSD2A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MFSD2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MFSD2A y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MFSD2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MFSD2 en células tumorales con expresión de MFSD2A silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.