Mfn2/Mitofusin 2 Plasmide Double Nickase (m): sc-431291-NIC

Mfn2 (Mitofusin 2) è una GTPasi di tipo dinamina ancorata alla membrana mitocondriale esterna, che media la fusione dei mitocondri e contribuisce a mantenere l’architettura della rete mitocondriale nelle cellule murine. Oltre al tethering delle membrane, MFN2 contribuisce ai siti di contatto tra mitocondri e reticolo endoplasmatico, che coordinano la gestione del calcio, lo scambio lipidico e la bioenergetica mitocondriale, collegandolo alle risposte allo stress cellulare e alla regolazione metabolica. L’alterazione di Mfn2 compromette la dinamica mitocondriale e può modificare la mitofagia, l’equilibrio delle specie reattive dell’ossigeno e la sensibilità all’apoptosi. Queste funzioni rendono Mfn2 un bersaglio ampiamente utilizzato negli studi sulla neurodegenerazione, sulla disfunzione cardiometabolica e sul rimodellamento mitocondriale associato all’infiammazione, sia in vivo sia in sistemi murini in coltura.

Mfn2/Mitofusin 2 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Mfn2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Mfn2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Mfn2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Mfn2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.