Plasmide CRISPR d'Activation (h) Metallothionein 4: sc-413667-ACT

MT4 code la métallothionéine 4, une protéine riche en cystéines capable de lier des métaux, qui contribue au tamponnement cellulaire du zinc et du cuivre et à la protection contre la toxicité des métaux lourds via une séquestration fondée sur les groupements thiols. En tant que membre de la famille des métallothionéines, la métallothionéine 4 soutient l’homéostasie redox en limitant le stress oxydatif catalysé par les métaux et peut moduler des programmes transcriptionnels sensibles aux métaux, notamment des voies régulées par MTF1. L’expression de MT4 est enrichie dans les épithéliums stratifiés, où la disponibilité des métaux et l’équilibre oxydatif influencent la différenciation et l’intégrité de la barrière. Des altérations de la signalisation des métallothionéines et une dyshoméostasie des métaux sont fréquemment étudiées dans les travaux sur les réponses épithéliales au stress, le remodelage tissulaire associé à l’inflammation et la toxicologie liée aux métaux.

Metallothionein 4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MT4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Metallothionein 4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MT4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MT4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Metallothionein 4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MT4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Metallothionein 4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Metallothionein 4 dans les cellules tumorales présentant une expression de MT4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.