megalin/LRP2 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-420631-LAC

Il gene murino Lrp2 codifica megalina/LRP2, un grande recettore endocitico multiligando della famiglia dei recettori LDL, altamente espresso negli epiteli assorbenti, inclusi il tubulo prossimale renale e il neuroepitelio. Megalina media l’assorbimento e il traffico dipendenti dalla clatrina di diversi ligandi, quali trasportatori di vitamine e lipoproteine, morfogeni e proteine leganti gli ormoni, collegando l’endocitosi mediata da recettore all’omeostasi dei nutrienti e alla segnalazione dello sviluppo. Attraverso i suoi ruoli nella polarità epiteliale, nel riciclo dei recettori e nel cross-talk con vie che includono sonic hedgehog e processi correlati ai retinoidi, LRP2 influenza la morfogenesi e la differenziazione tissutale. Alterazioni della funzione di LRP2 sono state associate a difetti nel riassorbimento proteico e ad anomalie dello sviluppo, a supporto della sua rilevanza in modelli di meccanismi di malattia renale e del neurosviluppo.

Le particelle di attivazione lentivirale megalin/LRP2 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Lrp2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale megalin/LRP2 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Lrp2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di megalin/LRP2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Lrp2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.