Plásmido Doble Nickase (h2) MECL-1: sc-402101-NIC-2

El gen humano PSMB10 codifica la subunidad beta tipo 10 del proteasoma (MECL-1), un componente catalítico inducible del inmunoproteasoma que sustituye a subunidades β constitutivas para remodelar las preferencias de corte proteolítico durante la señalización inflamatoria. MECL-1 contribuye al recambio de proteínas mediado por el sistema ubiquitina–proteasoma y potencia el procesamiento de antígenos para el MHC de clase I, vinculando las respuestas impulsadas por interferón con la vigilancia inmunitaria adaptativa y la modulación de programas de proteostasis asociados a NF-κB. La desregulación de la composición o la actividad del inmunoproteasoma se asocia con una presentación antigénica alterada y con la activación inmunitaria crónica observada en contextos de autoinmunidad, infección y evasión inmunitaria tumoral. La edición génica de PSMB10 permite la interrogación mecanística de los repertorios peptídicos dependientes del inmunoproteasoma, del control de calidad del proteoma bajo estrés por citocinas y del reconfiguramiento de vías inmunitarias en modelos celulares humanos.

MECL-1 El plásmido de doble nicasa (h2) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PSMB10 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PSMB10. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PSMB10. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PSMB10 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.