Plásmido Doble Nickase (h) MDM2: sc-400045-NIC

MDM2 codifica una ligasa E3 de ubiquitina que actúa como regulador negativo central de TP53 al ubiquitinar p53 y promover su exportación nuclear y su degradación por el proteasoma. A través de este bucle de retroalimentación, MDM2 modula las respuestas celulares al daño en el ADN y al estrés oncogénico, influyendo en los puntos de control del ciclo celular, la apoptosis y la senescencia mediante el programa transcripcional de p53. MDM2 también interactúa con la señalización RB/E2F y con vías de quinasas activadas por estrés, integrando señales de factores de crecimiento con la vigilancia del genoma. La expresión o actividad desregulada de MDM2 se asocia con frecuencia con un control deficiente de la vía de p53 y se estudia ampliamente en el contexto de la biología tumoral, la inestabilidad genómica y los mecanismos de respuesta a terapias.

MDM2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus MDM2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de MDM2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de MDM2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con MDM2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.