MCAD Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-418938

Descripción general

Acadm codifica la acil-CoA deshidrogenasa de cadena media (MCAD), una flavoproteína mitocondrial que cataliza el primer paso de deshidrogenación en la β-oxidación de ácidos grasos de cadena media, vinculando el catabolismo lipídico con la producción celular de ATP y el equilibrio redox. La actividad de MCAD favorece la flexibilidad metabólica durante el ayuno y en situaciones de alta demanda energética al alimentar el ciclo del TCA y la fosforilación oxidativa mediante la generación de acetil-CoA y la transferencia de electrones a través de ETF/ETFDH. La alteración de Acadm perturba la oxidación mitocondrial de ácidos grasos, modifica los perfiles de acilcarnitinas y puede promover efectos secundarios sobre las respuestas al estrés oxidativo y las redes de señalización lipídica. La deficiencia de MCAD es un error innato del metabolismo bien establecido, asociado a una utilización deficiente de ácidos grasos, lo que convierte a Acadm en un nodo relevante para estudiar la homeostasis metabólica mitocondrial en modelos murinos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO MCAD (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Acadm en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Acadm junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Acadm tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína MCAD.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Acadm para la investigación de la señalización de MCAD, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Acadm críticos para la función de MCAD
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Acadm para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido MCAD CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido MCAD CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Acadm. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR MCAD (m) y el plásmido HDR MCAD (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Acadm para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Acadm definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.