Matriptase Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402971-ACT

O ST14 humano codifica a matriptase, uma protease de serina transmembranar do tipo II que regula a proteólise pericelular nas superfícies epiteliais. A matriptase participa de cascatas de proteases ao ativar substratos como o pró-fator de crescimento de hepatócitos (pro-HGF) e outras proteínas extracelulares ou associadas à membrana, influenciando processos como a homeostase da barreira epitelial, a polaridade celular e o remodelamento do microambiente local. Ao modular a renovação da matriz extracelular e a disponibilidade de fatores de crescimento, a atividade de ST14 pode regular vias de sinalização ligadas à proliferação, diferenciação e migração. A expressão desregulada da matriptase ou sua atividade proteolítica tem sido associada à patobiologia epitelial e é frequentemente estudada em contextos de biologia do câncer, inflamação e remodelamento tecidual.

Matriptase O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ST14 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Matriptase O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ST14 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ST14, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Matriptase. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ST14 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Matriptase no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Matriptase em células tumorais com expressão de ST14 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.