MARCH11 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-416041

Panoramica

MARCH11 codifica una ligasi E3 dell’ubiquitina della famiglia MARCH (membrane-associated RING-CH) associata alle membrane, che si localizza prevalentemente su membrane endosomiali e secretorie, dove promuove lo smistamento, dipendente dall’ubiquitinazione, di specifiche proteine transmembrana. Regolando il traffico dei cargo tramite l’endocitosi e le vie di degradazione lisosomiale, MARCH11 contribuisce a modellare la composizione proteica della superficie cellulare e la dinamica delle membrane intracellulari. Questa attività collega MARCH11 a un controllo più ampio delle reti ubiquitina–proteasoma ed endolisosomiali, processi spesso implicati nella regolazione immunitaria, nelle risposte allo stress cellulare e nella segnalazione oncogenica. Un’ubiquitinazione e un turnover delle proteine di membrana deregolati sono inoltre associati ad alterazioni della segnalazione recettoriale e a difetti di proteostasi rilevanti per la biologia del cancro e per altri contesti patologici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MARCH11 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MARCH11 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MARCH11 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MARCH11 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MARCH11.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MARCH11 per lo studio della segnalazione di MARCH11, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MARCH11 critici per la funzione di MARCH11
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MARCH11 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MARCH11 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal MARCH11 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MARCH11. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MARCH11 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR MARCH11 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MARCH11 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MARCH11 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.