Plasmide CRISPR d'Activation (h) MAPKAP-1: sc-404288-ACT

MAPKAP1 code MAPKAP-1 (également appelé mSIN1), un composant essentiel du complexe 2 de la cible mécanistique de la rapamycine (mTORC2), qui contribue à déterminer l’assemblage du complexe, la sélectivité des substrats et la localisation subcellulaire. Via mTORC2, MAPKAP-1 favorise la phosphorylation de kinases de la famille AGC telles qu’AKT (Ser473), SGK et PKC, reliant la signalisation des facteurs de croissance à la survie cellulaire, au métabolisme, au remodelage du cytosquelette et à la migration. La signalisation dépendante de MAPKAP1 recoupe les réseaux PI3K–AKT–mTOR, fréquemment perturbés en cancérologie et lors de dérégulations métaboliques. Une expression altérée de MAPKAP1 ou une activité modifiée de la voie a été associée à des changements de la capacité proliférative, des réponses au stress et de phénotypes invasifs dans divers contextes cellulaires.

MAPKAP-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MAPKAP1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MAPKAP-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MAPKAP1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MAPKAP1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MAPKAP-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MAPKAP1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MAPKAP-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MAPKAP-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de MAPKAP1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.