Plasmide Double Nickase (m) MAN1A1: sc-421551-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) MAN1A1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide MAN1A1 Double Nickase (m) et le plasmide MAN1A1 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Man1a. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) MAN1A1 | sc-421551-NIC | 20 µg | $410.00 |
Man1a code l’alpha-1,2-mannosidase MAN1A1, une enzyme résidente de l’appareil de Golgi qui raccourcit les N‑glycanes riches en mannose au cours de la maturation des glycoprotéines. Cette étape de traitement contribue au remodelage des N‑glycanes, lequel influence le repliement et le trafic des protéines ainsi que la composition des glycoprotéines à la surface cellulaire, avec des effets en aval sur la sécrétion, la fonction des récepteurs et les interactions cellule–cellule. L’activité de MAN1A1 s’inscrit à l’interface des processus centraux de glycosylation et de contrôle qualité le long de la voie sécrétoire et peut moduler la protéostasie ainsi que la signalisation dépendante des glycannes. Une N‑glycosylation dérégulée et une activité des mannosidases altérée sont fréquemment associées à des phénotypes pertinents pour la biologie du cancer, la neurobiologie et la régulation immunitaire, ce qui soutient des études mécanistiques du traitement des glycannes dans des états cellulaires pertinents pour les maladies.
MAN1A1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Man1a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Man1a. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Man1a. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Man1a.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.