MAL CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403024

概要

MAL（ミエリンおよびリンパ球タンパク質）は疎水性の4回膜貫通型膜タンパク質で、糖脂質およびコレステロールに富む膜マイクロドメインに多く存在し、頂端膜への輸送や極性化した上皮構造の安定化に寄与します。細胞間接着の組織化や膜タンパク質の分布に影響する小胞輸送における選別・輸送過程に関与します。MALの発現は上皮系統における分化状態のマーカーとしてしばしば用いられ、複数のがんの文脈で膜動態の変化と関連づけられてきました。これには、腫瘍進展や免疫関連シグナルに結びつくエピジェネティックなサイレンシングや発現異常に関する報告も含まれます。これらの特性により、MALは膜区画化、極性輸送、ならびに上皮可塑性に関連する表現型を研究するうえで有用な標的となります。

MAL CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるMAL遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、MAL内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、MALのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、MALタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、MALシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、MAL欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• MALの機能に不可欠なMALエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、MALゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• MAL CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびMAL CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、MAL遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  MAL HDRプラスミド（h）および MAL HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMALホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMAL標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。