Plasmide CRISPR/Cas9 KO MAL (h): sc-403024

Présentation

MAL (myelin and lymphocyte protein) est une protéine membranaire hydrophobe à quatre passages transmembranaires (tétrapan), enrichie dans des microdomaines membranaires riches en glycolipides et en cholestérol, où elle contribue au trafic vers la membrane apicale et à la stabilisation de l’architecture épithéliale polarisée. Elle participe à des processus de tri et de transport vésiculaires qui influencent l’organisation des jonctions intercellulaires et la distribution des protéines membranaires. L’expression de MAL est fréquemment utilisée comme marqueur de l’état de différenciation dans les lignages épithéliaux et a été associée à une altération de la dynamique membranaire dans plusieurs contextes cancéreux, notamment via des rapports de silencement épigénétique ou d’expression dérégulée liés à la progression tumorale et à des voies de signalisation immunitaires. Ces propriétés font de MAL une cible utile pour étudier la compartimentation membranaire, le transport polarisé et des phénotypes liés à la plasticité épithéliale.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MAL (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MAL dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MAL, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MAL à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MAL.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MAL pour l'étude de la signalisation de MAL, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MAL essentiels à la fonction de MAL
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MAL pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MAL plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MAL plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MAL. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MAL plasmide HDR (h) et le MAL (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MAL pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MAL définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.