Plásmido CRISPR de Activación (h) MAGE-A3: sc-402571-ACT

MAGEA3 codifica MAGE-A3, un antígeno cáncer-testículo que suele estar silenciado en tejidos somáticos adultos, pero que puede inducirse en múltiples neoplasias mediante desregulación epigenética. MAGE-A3 participa en el control de la transcripción y de la proteostasis al interactuar con módulos de señalización de la familia MAGE que pueden modular la actividad de ligasas E3 de ubiquitina e influir en el recambio proteico, las respuestas al estrés y programas asociados al ciclo celular. Su expresión se vincula con frecuencia a estados alterados de presentación de antígenos y de reconocimiento inmunitario, lo que la convierte en una lectura molecular útil para estudiar la regulación génica asociada a tumores. Como marcador altamente restringido por linaje y asociado a enfermedad, MAGEA3 sirve como un locus modelo para investigar la regulación de la cromatina, la reactivación transcripcional y la remodelación de vías aguas abajo en células humanas.

MAGE-A3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MAGEA3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MAGE-A3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MAGEA3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MAGEA3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MAGE-A3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MAGEA3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MAGE-A3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MAGE-A3 en células tumorales con expresión de MAGEA3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.