Plásmido Doble Nickase (h) Mac-2BP: sc-403108-NIC

LGALS3BP codifica Mac-2BP (proteína de unión a galectina-3), una glicoproteína secretada y asociada a la matriz extracelular que modula las interacciones célula–célula y célula–matriz mediante socios de unión como las galectinas y las integrinas. Mac-2BP participa en la adhesión, la migración, la modulación inmunitaria y la remodelación del entorno extracelular, con efectos posteriores sobre la señalización inflamatoria y la comunicación entre tumor y estroma. Se ha descrito una expresión alterada de LGALS3BP en múltiples contextos de cáncer y de fibrosis/inflamación, y con frecuencia se evalúa como un componente del secretoma asociado a la enfermedad vinculado a biomarcadores. Estas características hacen de LGALS3BP una diana útil para estudiar la regulación del microambiente, el diálogo cruzado inmunitario–epitelial y vías relevantes para la metástasis en modelos celulares humanos.

Mac-2BP El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus LGALS3BP en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de LGALS3BP. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de LGALS3BP. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con LGALS3BP alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.