LYPLAL1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-414290-ACT

LYPLAL1は、リゾホスホリパーゼ様1（lysophospholipase-like 1）をコードしており、脂質の脱アシル化反応や細胞内脂質恒常性に関与するとされるセリンヒドロラーゼファミリーのタンパク質です。内因性基質や触媒作用の範囲については依然として研究途上ですが、LYPLAL1は脂肪酸の取り扱い、膜脂質のリモデリング、ならびにエネルギーバランス経路と交差する代謝シグナル伝達ネットワークの制御に関連づけられています。ヒト遺伝学研究では、LYPLAL1の遺伝子座が肥満度に関連する形質や心代謝リスク因子と関連することが示されており、肥満、インスリン抵抗性、脂質調節異常の研究における重要性が支持されています。これらの特性により、LYPLAL1は、脂質処理酵素が脂肪細胞、肝細胞、その他の代謝関連細胞環境にわたって代謝表現型にどのように影響するかを検討するための有用な標的となります。

LYPLAL1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性LYPLAL1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

LYPLAL1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における LYPLAL1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はLYPLAL1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性LYPLAL1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のLYPLAL1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるLYPLAL1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびLYPLAL1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるLYPLAL1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。