Plásmido CRISPR de Activación (h) Lyn: sc-400463-ACT

El LYN humano codifica Lyn, una tirosina cinasa no receptora de la familia Src que acopla la señalización de los inmunorreceptores y de los receptores de citocinas a cascadas de fosforilación aguas abajo. Lyn regula las vías del receptor de células B y del receptor Fc, ajustando los umbrales de activación mediante el control coordinado de la señalización PI3K/AKT, MAPK y NF-κB, y modulando el reclutamiento de fosfatasas. En células hematopoyéticas influye en la proliferación, la supervivencia, la migración y las respuestas inmunitarias innatas, mientras que en otros contextos puede afectar la adhesión y la dinámica del citoesqueleto a través de la señalización asociada a integrinas. La actividad o expresión desregulada de LYN se ha relacionado con alteraciones de la homeostasis inmunitaria y con la reprogramación de la señalización observada en neoplasias hematológicas y en mecanismos de enfermedades inflamatorias.

Lyn El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de LYN sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Lyn El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus LYN en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional LYN, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Lyn. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo LYN y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Lyn en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Lyn en células tumorales con expresión de LYN silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.