Partículas Lentivirales de Activación (h) LTRPC7: sc-402820-LAC

TRPM7 (LTRPC7) codifica un canal-cinasa único que conduce cationes divalentes, en particular Mg²⁺ y Ca²⁺, al tiempo que acopla el flujo iónico a un dominio citosólico de cinasa de serina/treonina. Al regular la homeostasis intracelular del magnesio, la dinámica del citoesqueleto y la señalización dependiente de Ca²⁺, TRPM7 influye en procesos como la proliferación celular, la migración, la mecanotransducción y las respuestas celulares al estrés. La actividad de TRPM7 se integra con vías vinculadas a la excitabilidad de membrana y a redes de señalización mediadas por quinasas que modelan la señalización inflamatoria y la adaptación metabólica. La expresión o función desregulada de TRPM7 se ha asociado con lesión neurológica y neurodegeneración, remodelado cardiovascular y un comportamiento de crecimiento alterado en múltiples contextos de cáncer, lo que lo convierte en un nodo relevante para estudios de genómica funcional centrados en rutas.

Las partículas de activación lentiviral LTRPC7 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de TRPM7 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral LTRPC7 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción TRPM7, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de LTRPC7. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo TRPM7 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.